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“上海恒遠”文獻:復合載蛇床子素支架材料修復兔下頜骨缺損的實驗研究

點擊次數:136 發布時間:2019/5/24
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實驗研究

郭延偉 李松 房殿吉*

(佳木斯大學附屬口腔醫院頜面外科 黑龍江  佳木斯    154000)

 

[摘要] 目的:探討 BMSCs/PRF 復合載蛇床子素支架材料修復兔下頜骨缺損的實驗研究的可行性。方法:36 只新西蘭大白兔隨機分為3組,每組12只,雙側下頜骨制備缺損模型。A 組植入 BMSCs/PRF 復合載蛇床子素支架材料;B 組植入 BMSCs復合載蛇床子素支架材料,C 組單植入納米羥基磷灰石支架材料。分別于術后2、4、8、12 周處死實驗動物,制備組織標本,行大體觀察、影像學分析、HE 染色、掃描電鏡檢測,并對影像學分析值及成骨情況加以評價,對分析數據結果使用SPSS17.0統計軟件進行分析,P <0.05 有統計意義。結果:影像學檢查及組織學染色顯示 A 組骨缺損處愈合程度,成骨速度及其質量明顯優于 B組C 組;掃描電鏡顯示 A 組該復合材料與組織相容性好,無炎癥刺激反應;統計牙 CT 分析數據及新生骨面積,A 組的成骨情況明顯優于B 組與C 組(P <0.05)。結論:BMSCs/PRF 復合載蛇床子素支架材料有明顯骨誘導作用,是一種新型復合材料,可望成為臨床應用中修復頜骨缺損的新型材料。

 

[關鍵詞] 骨  頜骨缺損  骨髓間充質干細胞 BMSCs   富血小板纖維蛋白 PRF   蛇床子素 Osthol

[中圖分類號] R782.4

[文獻標識碼] A

[文章編號] 1671—7651(2012)11—1087—05

 

下頜骨功能結構復雜,而造成其缺損的原因也很多,若不及時進行修復或修復不當,則常常會造成骨不連或延遲愈合等嚴重后果。隨著當代組織工程學及分子生物學的迅猛發展,利用干細胞作為種子細胞復合支架材料修復骨缺損成為近年來研究的熱點,骨髓間充質干細胞(BM- MSCs)以其多項分化的潛能及自身所具有的遺傳背景穩定和對機體無免疫排斥反應等優點成為理想的種子細胞[1~3]。PRF是繼富血小板血漿(platelet-richplasma,PRP)后第2代血小板濃縮液,以血小板凝膠形式呈現,其所內含的高濃度的生長因子能促進骨組織和軟組織再生修復,單獨或聯合其他生物材料注人硬組織缺損或軟組織創傷處,可以修補缺損,誘導生長,加速局部創傷的愈合并提高愈合質量[4~6]。實驗證明,蛇床子素 可 促 進 大 鼠 骨 髓 間 充 質 干 細 胞 (BM -MSCs)的增殖及向成骨細胞分化并抑制其向脂肪細胞分化,而且蛇床子素具有促進成骨細胞增殖的能力[7,8]。本研究將骨髓間充質干細胞作為種子細胞,以載蛇床子素的羥基磷灰石為支架材料,結合PRF 中多種生長因子及其誘導并促進成骨修復兔下頜骨缺損,為臨床應用提供了理論依據。

1 材料與方法

1.1   實驗動物 健康新西蘭大白兔36 只,體重2.

0~3.0kg,3~6月齡,雌雄不限,(由佳木斯大學動物實驗中心提供),材料及儀器:醫用納米級羥基磷灰石(上海源葉生物科技有限公司),蛇床子素(上海恒遠生物科技有限公司),離心機,JSM -6360LV掃描電鏡,倒置相差顯微鏡,牙 CT。

1.1.1   骨髓間充質干細胞的獲取及培養 無菌條件下,骨髓穿刺針兔雙側股骨大轉子處抽取骨髓3~5 mL,然后加入 20 mL 的 DMEM 培養液中混勻,過濾雜質后以1500r/min 離心20 min,離心完后取上層骨髓,加入5 mL 制成 DMEM 培養液制成單細胞懸液(細胞數為10 個/mL),然后置入容積為30 mL 的培養瓶中,加入10mL 含20%新生小牛血清、青霉 素 100 U/mL、硫 酸鏈霉素 100g/mL 的DMEM 培養液,再次離心1200r/min離心10 min,去上清,計數。然后置入37 ℃、5%CO2  培養箱內培養。細胞培養24h貼壁,呈梭形成纖維樣細胞生長,72h后大量細胞成纖維樣生長,部分區域成漩渦樣細胞群,見圖1。在細胞種植的第4 天第1 次換液,以后每2d換液1 次,細胞生長7~10d 后長滿瓶底面積的80%時2.5%胰蛋白酶收集計數并傳代。

 

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